精液经检查合格后,尚需经过稀释、分装、保存和运输等过程,最后用于输精。精液稀释是在精液里加一些配制好的、适宜于精子存活的并保持精子受精能力的溶液。早期的人工授精,精液稀释的目的是单纯为了增加精液的容量,以便为更多的母猪输精,从而提高公畜的配种效能。现代的人工授精,精液稀释不仅要增加精液的容量,还能使精液短期甚至较长期地保存起来、继续使用,便于长途运输,从而大大提高优秀公猪繁殖率。因为一头公猪每次射精所获得的精子数远远大于授精所要求的精子数,大约多15-30倍。 (1)稀释液的成分 一般精液稀释液包括有一种或多种保护剂,尽管目前采用的精液稀释液配方多种多样,但就其化学组成上来看主要有以下一些成分:
营养剂:减少精子自身能量消耗,以便延长精子寿命,一般为糖类,如葡萄糖、果糖。
稀释剂;主要扩大精液容量。因此这类物质的剂量,必须与精液具有相同的渗透压,一般采用等渗的氯化钠、葡萄糖、果、蔗糖以及某些盐类溶液。
保护剂:为降低精液中的电解质浓度起缓冲作用,一般用于缓冲的物质有柠檬酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等。
抗生素:以阻止细菌生长,常用抗生素有青霉素、链霉素、庆大霉素、林肯霉素等
(2)稀释液的配制 猪精液常温保存常用的稀释液种类很多如EDTA、GuelPh、BTS、Zorpva、Reading等。
可以根据保存期的长短要求选择配方,配制时各种成分称量务必要准确,如果不能保证称量准确,最好采用配制好的商品稀释液粉。
由于稀释液在溶解后1小时内其pH出现明显的波动,到约1小时后才达到平衡。pH的变化可能对精子造成不利。
(3)精液的稀释和稀释倍数 在公猪的一次射精的精液中,包含的精于数远远多于一头母猪受精所需的数量。因而,可将精液稀释多倍,供多头母猪输精用,如果已测得精密度,那么可按比例稀释,要求稀释后每毫升稀释精液含1亿个精于为原则进行稀释。如果密度没有测定,稀释倍数一般以2―4倍为宜。
加入精液稀释液应在精液采出后尽快进行,因为新鲜精液不经稀释不利于精子存活,特别是当室温较低时,精子容易受到低温刺激,甚至出现温度性休克。所以在采出精液后,应注意保温,使集精瓶的温度在采精后维持在30℃左右,精液与稀释液的温度必须调整到一致,一般是将精液与稀释液置于同一温度(30℃)中,温度相同后即可进行稀释。方法是将一定量的稀释液沿杯壁缓慢倒入精液杯中,轻轻摇匀,如果稀释倍数大,先进行低倍稀释,防止精子所处的环境的突然改变,造成稀释打击。
(4)精液的保存 稀释后即进行保存。猪目前大都采用常温液态保存,最佳保存温度为16-18℃,为保持这一温度,夏天应将精液保存于常温冰箱中,冬天则应保存于恒温箱中。虽然,常温保存可将精液保存7天,但在实践中,保存精液不应超过3天。在精液存放阶段,精子多沉淀在容器的底部,因此,通常每天要将容器倒置1-2次,以保证精子均匀地分布在稀释液中。
精液常温保存的原理是利用酸抑制精子的代谢活动,而不是通过温度达到这一目的。因为在中性和弱酸性的环境中,精子代谢正常,当降低到一定的酸度后,精子的活动受到抑制,在一定PH范围内,这种抑制是可逆的,当pH恢复到7左右时,精子可以复苏,如PH继续降低,超出此范围,则出现不可逆抑制。研究结果表明,不同的酸类对精子发生抑制的pH区是不相同的。一般认为,有机酸较无机酸为好,容易产生抑制,而且可逆性抑制区较宽阔。
总之,在精液稀释和保存过程中,以温度、PH值、渗透压等变化最小为好。