在预防传染病的各种手段中,免疫预防是属于较方便、有效和经济的措施,而且它具有无抗药性、免疫力较持久的特点,尤其是对某些给药困难、治愈率低的水生动物疾病,更是效果明显,可大大提高成活率,故是一种值得推广的预防措施。现以鳖的传染性疾病为例,介绍免疫预防的方法。
一、组织浆土法疫苗的制备
1.取材:取具有典型症状的濒死病鳖(如患红脖子病、红底板病、腐皮病),体表反复冲洗,并用75%的酒精棉球擦拭以后,用煮沸后的剪刀解剖,取出肾、脾、肝、肠等病变组织。若在野外工作,可将病变组织保存在50%磷酸甘油缓冲液中,放在冷藏瓶中带回实验室,然后保存在4℃冰箱中,临用时,将病变组织取出,用无菌生理盐水洗3~4次。
2.匀浆:将病变组织冲洗称重后,剪碎,加10倍量的无菌生理盐水,匀浆(要匀碎),每分3000~4000转/分低温离心30分钟,然后取上清液(即悬液)。若条件简陋,可将剪碎后的病变组织,加10倍量的0.85%生理盐水,用研钵磨碎,然后用两层纱布或滤纸过滤,取其滤液。
3.灭活:将上清液(或滤液)经60~65℃恒温水浴2小时,再加福尔马林(含甲醛40%),使最终浓度为0.5%。此后,加入亚硫酸钠溶液,使其最终浓度为2‰,以终止福尔马林的作用。
4.安全及效力试验:①安全试验。设对照缸和测验缸各一只,各放入健康幼鳖几只(规格每只约200g),将水温逐渐上升至28℃,试验缸的鳖每只注射上述制备的疫苗0.2ml,对照缸的则注射无菌生理盐水,均采取腹腔注射法。饲养观察15天,两缸鳖都不发病,则说明注射技术过关,疫苗安全;若试验缸的发病,对照缸的安全,则说明疫苗灭活不够,须再灭活,再做安全试验,如仍不安全,只好将这批疫苗废弃。若证实安全了,再进一步做效力试验。②效力试验。对做过安全实验的两缸鳖,各腹腔注射滤液0.2ml,继续饲养15天,若试验缸的鳖不发病,而对照缸的发病,则证明疫苗有效;若两缸鳖都发病,则证明疫苗无效。
5.保存:用石蜡封瓶口,贴上标签,放在4℃冰箱内保存,或气温较低的荫凉处保存。
二、免疫预防方法
疫苗接种的方法有注射、喷雾、高渗浸泡、强毒感染和口服法等,但目前主要采用注射法进行免疫。注射法一般选择后肢基部或腹甲与后肢连接处。注射一般选用5~5.5号针头,进针深度约1cm,注射用量一般幼鳖为0.1~0.2ml,500g以上的成鳖为0.5ml。
三、免疫时间
对幼鳖用组织浆土法疫苗进行免疫注射,在实践中已证明有显著效果,但由于其免疫力出现时间较慢,因此一定要在发病季节来到之前完成注射工作。时间一般在4~5月幼鳖由温室转入室外鳖池饲养时进行,也可以在清理鳖池,将鳖集中后实施。
四、注意事项
1.对于已腐烂的病鳖内脏,一般不宜做疫苗材料。
2.疫苗制备与注射过程中所用工具均需做好消毒工作,已污染的疫苗不能再使用。