精液稀释的目的是要使一头公猪的繁殖力比自然交配扩大很多倍,而且受胎率并不下降。例如:一头公猪一次射精所获得精子数目比受精要求的数目多得多,大约多15―30倍。稀释后的输精量一般为50mL左右,其中含活精子数为2000×10000000个。稀释液的要求是应该对精子的活率、受精力以及单个精子的总存活能力没有影响。
精液稀释倍数的确定:
稀释倍数=精液量(ml)×精子密度(×10000000/ml)×精子活率(%)×(1-异常精子%)/2000×10000000(单次输精所需的最少有效精子数)
精液稀释后的总体积(mL)=单次输精量(mL)×稀释倍数
1.稀释液的成分一般精液稀释液包括有一种或多种保护剂,尽管目前采用的公猪精液稀释液有多种多样,但就其化学组成上来看主要有以下一些成分。
(1)代谢或营养物质,以减少精子自身能量消耗,以便延长精子寿命,一般为单糖,如葡萄糖。
(2)适宜的缓冲体系,以保持精液的pH及渗透压的基本稳定。
(3)大分子物质,以保护精子免受降温的不利影响,如牛血清白蛋白。
(4)抗生素,以阻止细菌的生长。
2.稀释液的配制精液稀释液的种类很多,正在试验尚未定型的更多,采用何种稀释液应根据其效果、保存方法和成分是否容易得到而定。配制时要注意下列事项。(1)配削稀释液所使用的一切用具,必须彻底洗涤干净,消毒后,用前并经稀释液冲洗才能使用。
(2)稀释液必须保持新鲜,要现配现用。如条件许可,经过消毒、密封,可在冰箱中存放1周,但卵黄、抗生素、酶类、激素类等成分,须在临用时添加。
(3)所用的蒸馏水或去离子水要求新鲜,pH呈中性。如使用沸水应在冷却后用滤纸过滤,并经试验,证明对精子无不良影响者,方可使用。
(4)配制稀释液所用的药品,成分要纯净,称量要准确,充分溶解,经过滤密封后进行消毒(隔水煮沸,或蒸汽消毒30min),加热应缓慢,防止失水和容器破裂。
(5)使用奶类要求新鲜(奶粉以淡奶粉为宜),尤其鲜奶须经过滤,然后在水浴中灭菌(92―95℃)10min,抑制对精子有杀害作用的乳烃素,并除去奶皮后方可使用。
(6)卵黄要取自新鲜鸡蛋,先将外壳洗净消毒后,取纯净卵黄并充分搅拌后,在室温下加入稀释液,并充分混合使用。
(7)抗生素、酶类、激素类、维生素等添加剂,必须在稀释液冷却至室温时,按用量准确加入;氨苯磺胺可先溶于少量蒸馏水(水量计入总量中),单独加热至80℃,溶解后加入稀释液中。
3.稀释方法
(1)新采取的精液应迅速放入30℃保温瓶中,以防止温度变化。特别是当室温低于20℃时,由于冷刺激,精子可能出现冷休克现象,以免不利于精子保存。
(2)采精后,精液应尽早稀释,原精液放置时间过长则降低其活率,一般最好在30min以内完成稀释。
(3)稀释液与精液的温度必须调整一致,一般是将稀释液及精液置于30℃左右的保温瓶内片刻作同温处理。
(4)稀释时,使稀释液沿精液瓶壁缓缓加入,防止将精液迅速倒入稀释液内,造成局部稀释打击。
(5)稀释后将精液瓶轻轻转动,使精液与稀释液混合均匀,切忌剧烈震荡。
(6)如作高倍稀释,应分次进行,先低倍后高倍,防止精子所处的环境突然改变,造成稀释打击。
(7)精液稀释后,即进行镜检,如果活率下降,说明稀释或操作不当。