高锰酸钾检测钙与乙二胺四乙酸（EDTA）快速滴定钙，分别是现行的国标方法（GB／T 6436－92）和国家推荐的快速测定方法。高锰酸钾法尽管测定数据准确可靠，但繁琐、耗时，很难满足实际生产中饲料品控快速准确出结果的要求。EDTA 法具有快速、简便等优点可以满足这一要求，但EDTA法测定结果与高锰酸钾滴定测定结果偏差大，精确度较差，滴定终点变色不明显，而双波长吸光度差法用于饲料及原料钙的测定，操作简便快速，结果准确可靠，与国家标准基本一致，并明显优于EDTA配位滴定法。我们用这三种方法测定了三个有代表性的饲料产品和原料，对方法的精密度、重现性及回收率进行了比较。

    1  材料与方法 

    1．1  高锰酸钾法  EDTA法:  

    1．2 样品  选取市售的猪、鸡饲料产品及骨粉，作为试样。

    l，3主要仪器与试剂   高温炉：可控温度在550℃±20℃ ；可调温电炉：1000W；盐酸：1：3水溶液；高锰酸钾标准溶液：0.03 m0I/L；EDTA标准溶液：称取 3.8 g EDTA加入200 mL水，加热溶解后定容在1000 mL容量瓶中；淀粉溶液：1%水溶液二乙醇胺：1：1水溶液；乙二胺：1：1水溶液；KOH：20%水溶液；钙黄绿素一甲基百里香酚蓝指示剂：0.1g钙黄绿素。0.13 g甲基百里香酚蓝、5 g氯化钾研细备用。

    1.4  分析方法 高锰酸钾法（GB／T 6436－ 92）

    EDTA法（GB／T 6436－92）。

    1.5  双波长吸光度差法：

    1.5.1 主要仪器与试剂  721型分光光度计；对乙酰基偶氮胂（PPA）：0.05%水溶液 ；钙标准溶液标；称取于105?110℃干燥至恒重的基准碳酸钙0.2498 g溶于lml盐酸和10ml水的混合液中,再移入100ml容量瓶中,加水稀释至刻度，混匀，得100µg／ml储备液,使用时稀释至5µg/ml混合掩蔽剂：10％三乙醇胺、10％乙二胺、1%酒石酸以1：2：3混合配成。

    1.5.2  分析方法

    1.5.3  准确移取钙标准溶液于25ml容量瓶中，加入PPA溶液2.5ml、混合掩蔽剂溶液1.0ml、氢氧化钠溶液（0.005mol/L）2.5ml用水稀释去刻度摇句, 用1?比色血，在721分光光度计上于630nm处，以空白试剂为参比测得络合物溶液吸光度a, 在520nm处以络合物溶液为参比测得试剂空白吸光度b，以 △A=a+b替代A。

    1.5.4  双波长的确定：分别移取2µg、8µg钙于25 ml容量瓶中，按单波长法绘制络合物的吸收光谱，确定以络合物的最大吸收波长630nm为测定波。因试剂最大吸收波长处络合物的吸收为零，故以络合物的最小吸收波长520nm为参比波长。

    2  结果与讨论

    2.1 双波长光度法是在普通分光光度法的基础上发展起来的一种能有效地提高灵敏度、改善选择性、消除背景干扰等的好方法，普通分光光度法，一般总是以试剂空白为参比测定混合显示液的光度，并认为此吸光度就是被测组分与显示剂所形成的配合物的吸光度。但由于混合显示液中有部分显示剂已被金属离子配位，此时以试剂空白做参比的显示是过量的，它并不能代表与金属离子配位后剩余的显示剂浓度。因此，单波长光度法中以试剂空白做参比测定的配合物吸光度实际上并非完全测出了配合物的吸光度，而是比实际的吸光度要小。在双波长光度法中，以配合物的最大吸收波长630nm为测定波长a，以配合物吸收曲线下端的某一波长630nm 或显示剂的最大吸收波长为参比波长b，将由于配合物的形成而消耗的显示剂的吸光度值直接叠加在生成的配合物吸光度值上。从而抵消了单波长法所降低的吸光度值，

    即：△A双=a＋b。由于普通光度法中、只有a没有b因此双波长法的灵敏度大于单波长法。

    2. 2  测定精确度及比较   称取试样性2?5g置坩埚中（准确至0.0002g）,在电炉上小心炭化，再放入马福炉上550℃下灼烧3小时,在盛灰坩埚中加入盐酸溶液10 ml和浓硝酸数滴。，小心煮沸，将此溶液转入100 ml容量瓶，冷却至室温，再用蒸馏水稀释至刻度, 摇匀, 即为试液分解液。如果饲料中的钙量较多，试样分解液须稀释处理, 移取1?5ml已????せ??潢???
?稀释的试样（含钙30ug）于25ml容量瓶中，按前述步骤操作测定。并分别用高锰酸钾法和EDTA法三种方法测定试样作比较。结果见附表。

附表               结果比较

 

双波长吸光度法

高锰酸

钾法

EDTA法

平均值

标准偏差

平均值

标准偏差

猪浓缩饲料

1.98

0.01

1.96

2.01

0.02

蛋鸡配合饲料

2.98

0.016

2.93

3.03

0.021

骨  粉

27.85

0.021

27.87

28.69

0.026

    注  KMnO4法的平均测定次数2次，其余均为5次

    用三种方法分别对 3个具有代表性的饲料样品进行测定比较，测定结果表明，双波长光度法和EDTA法的精确度都不错，三种方法的测定结果相对偏差符合国标 GB／T 6436－92中的误差规定要求（含钙量在5％以上允许相对偏差3％，含钙量 5％－l％时允许相对偏差 5％）。

    2.3  回收率试验  在饲料中加入钙标样0.05g,按照三种方法同时做试验,计算回收率,结果为：高锰酸钾法回收率在97.33%?99.15%之间，EDTA法回收率在 98.9%?101.68%之间, 双波长吸光度差法回收率在98.11%?99.56%之间。

    2.4 结论   EDTA法测定结果比高锰酸钾法偏高，其原因与样品钙含量有关。对于钙含量低的样品，两法测定结果比较接近；而对于高钙样品，EDTA法测的高。而用双波长吸光度差法，测定结果好于EDTA法，最接近高锰酸钾法。