各类维生素缺乏或比例失调，以及矿物元素不足和失衡会对鱼类肝脏正常代谢造成不良影响，而草鱼肝胆病的发生通常与饲料有关，甚至是首要因素

　　□文/西南大学水产动物繁育和健康养殖研究中心 江海燕 郑宗林 吴宇 张宗祥

　　拜耳（四川）动物保健有限公司 刘涛 姚瑞清

　　草鱼肝胆病的发生通常与饲料有关，甚至是首要因素。目前投喂的人工配合饲料的蛋白质含量大多在24-30％之间，粗纤维含量一般小于12％。蛋白质的大量摄入，促进了草鱼的快速生长。虽然满足了营养需求，但草鱼腹部呈膨大状，体形粗而短，与食草草鱼相比胸围与体长之比偏大，失去了早先固有的细长条的优美体态。另外部分蛋白质在鱼体内被转化成了脂肪，堆积在肠系及肝部周围，加重了肝脏的负担，直至形成脂肪肝；另一方面，人工配合饲料由于经过高温高压蒸煮后，原料中所含的维生素等破坏损失较多，各类维生素缺乏或比例失调，以及矿物元素的不足和失衡同样会对肝脏的正常代谢功能造成不良影响和损害。本试验拟在草鱼饲料中补充一定量的以矿物元素为主要有效成分的鱼类促长保肝类产品-拜水安（BSA），判定其对草鱼生长和肝脏的保护效果。

　　1、材料与方法

　　1.1试验鱼及试验设计

　　试验用草鱼（Ctenopharyngodon idellus）为当年人工繁殖的同一批苗种，购自重庆市荣昌县梅石坝渔场，试验在西南大学水产系室内循环养殖系统中进行。试验前暂养1周，试验采用的养殖设施为长方形玻璃缸（总体积0.4m3，水体体积0.3m3）。养殖试验期间均连续充氧（除投饵期间外）。试验开始前停饲24 h，选择体重相近(30.0±1.5)g，体格健壮的草鱼鱼种600尾，随机分配于15个养殖缸，每缸40尾。试验分5个处理组，分别为阳性对照组、阴性对照组、BS1组（BSA500g/t饲料）、BS2组（BSA1000g/t饲料）和BS3组（BSA2000g/t饲料）。每天早、中、晚投喂3次，至饱食，投喂结束后30min，吸出池内残饵及粪便。试验期间水温25.0±1.0℃，pH7.5±0.5，溶氧≥5mg/L，氨氮<0.2mg/L，余氯<0.1mg/L，养殖试验共进行56天。

　　试验前预先测定草鱼96h的Cu2+半数致死浓度(LC50)，本试验条件下的96 h LC50为(0.82±0.13)mg·L-1，根据LC50设计Cu2+含量梯度再进行药物性肝病造模试验，选择肝病现象明显、酶学指标变化显著的0.21mg·L-1 (Cu2+含量)作为肝病模型的造模浓度。养殖第3周，将阳性对照、BS1、BS2和BS3组的草鱼浸浴于0.21mg·L-1 (Cu2+含量)的硫酸铜液体中4天，每天换液以保证溶液浓度。硫酸铜浸浴期间，饲料投喂暂停，间歇充氧，浸浴结束后，置于无硫酸铜的水体中饲养至第8周试验结束。

　　1.2试验饲料

　　配制饲料前，饲料原料均经粉碎机粉碎并全部过60目筛，制成直径为1.5mm左右的颗粒饲料，在30℃鼓风干燥箱内干燥24 h，置冰箱0℃保存。"拜水安（BSA）"产品由拜耳（四川）动物保健有限公司提供。具体配方组成和营养成分分析见表1。

　　1.3 指标测定

　　8周养殖试验结束后，按如下要求或规程测定相应的生长、胃肠酶活性和肝酶指标等。

　　1.3.1 生长速度

　　鲜重鱼质量变化、增重率和特定生长率等表示生长速度。

　　1.3.2 饲料利用效率

　　以饲料系数和蛋白效率表示。

　　1.3.3 全鱼营养成分测定

　　试验结束每处理组取9尾鱼，进行全鱼营养成分分析。鱼体肌肉常规成分分析均用AOAC方法。其中水分采用105℃烘箱干燥恒重法，粗蛋白质采用凯式定氮法（总氮×6.25），粗脂肪采用索氏抽提法(以乙醚为抽提液)，粗灰分采用马福炉中灼烧法(550℃)。

　　1.3.4 形体指标

　　以肥满度、内脏指数（内脏重与体重比）、肝胰指数（肝胰脏重与体重的比）等指标对鱼体形态进行评价。

　　1.3.5 消化酶活性测定

　　脂肪酶活性测定：采用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法；蛋白酶活性测定：采用福林-酚试剂法。

　　1.3.6 肝脏抗氧化活性测定

　　4℃条件下，肝脏样品经离心（600×g）后，取上清液用于各指标测定。采用南京建成生物技术研究所的试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛（MDA）和溶菌酶（LSZ）的含量或活性。

　　1.3.7 肝组织显微病理学研究

　　在冰盘中剖杀试验草鱼，取肝脏，Bouin`s液固定，石蜡包埋，切片5 μm，HE染色，光镜观察。

　　1.4 试验数据的统计分析

　　采用SPSS13.0 统计软件对数据进行统计学分析，先对数据作单因素方差分析(ANOVA)，处理间若有显著差异，再作Duncan:s多重比较，P<0.05表示差异显著。

　　2、试验结果

　　2.1 对生产性能的影响

　　草鱼经硫酸铜肝病造模之后，阳性对照组的草鱼增重率、特定生长率、蛋白效率和成活率最低，显著低于阴性对照组和BSA补充组（P<0.05），且随着BSA添加量的增加，各指标都有提高趋势；但除BS3组的增重率比阴性对照显著提高外（P<0.05），其余各BS组的增重率、特定生长率、蛋白效率和成活率与阴性对照无显著差异（P>0.05）。BS组与阴性对照组之间的草鱼饲料系数无显著差异（P>0.05），但均显著低于阳性对照组（P<0.05）（表2）。

　　2.2 对全鱼营养成分和肝脂的影响

　　肝病造模及BSA对全鱼粗脂肪和水分都没有显著影响，但BSA对全鱼粗蛋白含量较阳性对照组显著提高（P<0.05）。肝病造模后的阳性对照的肝脂含量显著高于其余各组，而BSA的补充显著降低了肝脂含量（P<0.05）（表3）。

　　2.3 对草鱼形体的影响

　　阳性对照的肥满度显著低于阴性对照和BS组（P<0.05），且随着BSA的增加，肥满度有提高趋势，但除BS3组的肥满度比阴性对照显著提高外（P<0.05），其余各BS组的肥满度与阴性对照无显著差异（P>0.05）。阳性对照的草鱼肝体指数和内脏指数显著高于阴性对照和BS组（P<0.05），但BS组与阴性对照无显著差异（P>0.05）（表4）。

　　2.4 对草鱼肝酶的影响

　　试验以草鱼肝脏超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性，及丙二醛（MDA）生成量来判定其抗氧化性能（表5）。肝病造模和BSA的补充对草鱼肝CAT活性无显著影响（P>0.05），而肝病造模导致阳性对照草鱼肝MDA生成量和SOD活性比阴性对照和BSA补充组显著提高（P<0.05）；补充BSA后，草鱼肝谷丙转氨酶（GOT）、谷草转氨酶（GPT）和溶菌酶（LSZ）活性比阳性对照有显著降低，比阴性对照略有提高。

　　2.5 对草鱼胃肠消化酶的影响

　　阴性对照组的草鱼前肠和中肠的蛋白酶活性与阳性对照组和BS组间均无显著差异（P>0.05），后肠和胃蛋白酶活性随BSA的补充有明显的上升趋势，其中BS3组的后肠和胃蛋白酶活性显著高于两个对照组（P<0.05）（表6）。

　　BSA的补充提高了草鱼肠道脂肪酶的活性，BS3组的草鱼前、中和后肠脂肪酶活性比对照组都有显著提高（P<0.05），但各组间胃脂肪酶活性无显著差异（P>0.05）（表7）。

　　2.6 BSA对草鱼肝脏的影响

　　用硫酸铜造肝病模型后，阳性对照组草鱼肝组织糜烂，坏死，肝细胞崩解，细胞核消失（见后插彩页图2）；阴性对照组草鱼肝细胞索结构完整，肝细胞排列整齐，细胞结构较清晰（见后插彩页图3）；同样肝病造模后，在BS1组草鱼肝细胞变得相对正常，但肝细胞索结构发生变异，结构不完整（见后插彩页图4）；BS2组草鱼肝细胞结构完整，但排列不够整齐，肝细胞有轻微病变，部分扭曲（见后插彩页图5）；BS3组草鱼肝细胞结构完整，胰岛结构清晰完整，细胞排列整齐（见后插彩页图6）。

　　3、小结

　　3.1 BSA对草鱼生产性能的影响

　　试验第3周草鱼进行肝病造模后，与未肝病造模（阴性对照）相比，造模组（阳性对照）的各项生长性能指标均显著降低，饲料利用率下降。在肝病造模的情况下，草鱼饲料中补充BSA（500-2000g/t饲料）后，其生长性能各项指标均有显著改善，甚至BS3组的草鱼增重率、蛋白效率等较阴性对照（未造模）还有显著提高。

　　3.2 BSA对草鱼全鱼营养成分和肝脂的影响

　　肝病造模及饲料中补充BSA对草鱼全鱼粗脂肪和水分无显著影响，但却显著降低了全鱼蛋白的含量，并显著增加了肝脂的含量。

　　3.3 BSA对草鱼形体的影响

　　草鱼进行肝病造模后，其肝胰指数和内脏指数均比阴性对照组显著提高，且肥满度降低；但补充BSA后，其肥满度得到显著提高，肝胰指数和内脏指数都有显著下降。

　　3.4 BSA对草鱼肝酶的影响

　　CAT活性未受肝病造模和BSA补充的影响；而肝病造模导致阳性对照组草鱼肝MDA生成量和SOD活性比阴性对照组和BSA补充组显著提高；补充BSA后，草鱼肝GOT、GPT和LSZ活性比阳性对照有显著降低，比阴性对照略有提高。

　　3.5 BSA对草鱼胃肠消化酶的影响

　　肝病造模后，与阳性对照组相比，BSA的补充显著增加了草鱼胃和后肠的蛋白酶活性，同时对肠道的脂肪酶活性也有显著提高。

　　3.6 BSA对草鱼肝脏形态结构影响

　　组织切片结果表明，肝病造模引起草鱼肝脏较严重的损伤，但饲料中补充BSA后，对肝病的恢复有显著的作用。

　　4、结论

　　饲料中补充BSA（500-2000g/t饲料）后，可促进草鱼生长性能和饲料效率的提高，并对肝脏有较明显的保护作用。

 

表1 饲料配方组成及营养分析

配方原料（%）

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

　

营养指标（%）

鱼粉（CP62.5%）

3.00

干物质

89.00

豆粕（CP43%）

3.00

粗蛋白

29.00

棉粕（CP42%）

25.00

粗脂肪

3.17

菜  粕

30.00

粗纤维

7.80

小  麦

15.00

灰  分

14.04

洗米糠

10.00

钙

0.67

膨润土

6.00

总  磷

1.30

麸  皮

5.00

 

 

菜  油

0.50

 

 

多  维

0.50

 

 

多  矿

0.50

 

 

磷酸二氢钙

1.50

 

 

 

表2 BSA对草鱼生长性能的影响

分组

增重率(%)

蛋白效率(g:g)

特定生长率(%/d)

饲料系数(g:g)

成活率(%)

阳性对照

52.65a±4.86

1.14a±0.08

0.99a±0.09

3.02a±0.20

87.50a±2.50

阴性对照

100.86b±8.81

1.52bc±0.12

1.27b±0.08

2.28b±0.17

98.33b±1.44

BS1

103.18bc±6.61

1.46b±0.09

1.31b±0.06

2.36b±0.16

97.50b±2.50

BS2

111.89bc±5.67

1.49bc±0.05

1.35b±0.04

2.31b±0.08

99.17b±1.44

BS3

114.67c±4.89

1.66c±0.11

1.38b±0.07

2.08b±0.13

99.17b±1.44

 

表3 BSA对草鱼全鱼营养成分和肝脂的影响（%）

分组

全 鱼

肝脂

粗蛋白

粗脂肪

水分

灰分

阳性对照

12.51a±0.26

8.98a±0.23

72.11a±1.03

3.28b±0.08

41.20c±0.67

阴性对照

13.27b±0.17

9.15a±0.27

71.67a±0.54

3.12a±0.06

37.47b±0.19

BS1

13.45bc±0.18

8.92a±0.13

71.77a±0.58

3.14a±0.03

37.94b±0.72

BS2

13.42bc±0.16

9.09a±0.04

72.48a±0.48

3.20ab±0.06

36.37a±0.56

BS3

13.82c±0.46

8.86a±0.10

71.80a±0.33

3.17ab±0.08

35.74a±0.43

表4 BSA对草鱼形体指标的影响（%）

分组

肥满度

肝胰指数

内脏指数

阳性对照

1.11a±0.07

2.48c±0.16

8.73b±0.46

阴性对照

1.28b±0.09

2.05ab±0.09

7.62a±0.20

BS1

1.30b±0.12

2.13b±0.04

7.78a±0.42

BS2

1.31b±0.05

1.88a±0.09

7.59a±0.18

BS3

1.48c±0.06

1.89a±0.11

7.36a±0.20

 

表5 BSA对草鱼肝酶的影响

分组

过氧化氢酶

(U/mg 蛋白)

丙二醛

(nmol/mg 蛋白)

超氧化物歧化酶

(U/mg 蛋白)

谷丙转氨酶

（U/L）

谷草转氨酶

（U/L）

溶菌酶

（U/ml）

阳性对照

0.10a±0.02

175.93d±15.18

252.95c±5.39

7.65a±0.77

30.35a±3.61

6.58c±0.72

阴性对照

0.09a±0.01

50.65a±8.57

148.46a±12.39

16.68d±0.83

47.24b±2.56

4.39a±0.33

BS1

0.09a±0.00

94.05c±10.68

169.63b±15.68

15.79cd±0.87

43.44b±4.80

4.93ab±0.24

BS2

0.08a±0.02

69.89ab±9.20

152.33ab±7.84

14.60bc±1.09

43.45b±1.97

5.51b±0.45

BS3

0.08a±0.02

77.42bc±11.28

152.45ab±8.29

13.75b±1.12

42.89b±1.26

5.43b±0.47

表6 BSA对草鱼胃肠蛋白酶活性测定(μg·g-1·min-1 )

分组

前肠

中肠

后肠

胃

阳性对照

1491.77a±47.49

729.67a±19.38

325.75a±15.66

2096.72a±114.43

阴性对照

1584.46ab±54.80

728.78a±12.56

365.52ab±8.75

2161.89a±102.22

BS1

1685.15ab±52.75

765.12a±51.18

412.14bc±63.38

2243.56ab±79.63

BS2

1747.63b±76.14

744.73a±62.08

569.73d±38.77

2389.57ab±102.52

BS3

1786.87b±226.47

757.42a±43.57

473.42c±31.57

2497.64b±315.78

 

表7 BSA对草鱼胃肠脂肪酶活性测定(μg·g-1·min-1 )

分组

前肠

中肠

后肠

胃

阳性对照

135.60a±9.47

104.41a±7.80

63.94ab±3.62

262.90a±5.46

阴性对照

143.09a±7.60

103.47a±8.57

56.84a±4.37

258.02a±3.11

BS1

172.90b±17.77

123.81b±5.07

71.27bc±7.12

268.54a±15.35

BS2

184.97b±11.50

136.44bc±6.70

82.29c±12.82

262.42a±18.62

BS3

215.13c±13.30

140.71c±7.34

84.46c±5.39

266.23a±13.07