猪细小病毒的病源诊断与防制
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    猪细小病毒感染是由猪细小病毒(PPV)引起的一种接触性疾病,其特征为胚胎和胎猪死亡,出现干尸化胎儿(木乃伊),死胎、早产、弱仔和少仔而无母体症状,只感染猪,并可获得高水平的终生免疫。

    1病原学

    PPV属于细小病毒科(Parvoviridae)细小病毒属(Parvovirus),只有一个血清型,与其他动物的细小病毒的血清学关系尚不十分清楚。

    成熟病毒粒子为无囊膜等轴廿面对称体,直径18~20nm,病毒衣壳由直径2~4nm的32个壳粒组成,在病毒内未发现脂质、碳水化合物和酶,完全病毒分子量为5.3×10道尔顿;基因为单链DNA,沉降系数为105S,在氯化涿中的的浮密度(cscl)为1.38~1.395g/立方米。空壳病毒直径相同,但浮密度小(1.305~1.315g/立方米),沉降系数较小(66S)。在各种病料标本中,空壳病毒在数量上占优势。

    病毒粒子对乙醚和酸有抵抗,对热、消毒药和酶的耐受力很强,对pH适应范围很广。能在细胞核内繁殖,受感染细胞呈现变圆、固缩和裂解等病变,并可用免疫荧光技术查出胞浆中的病毒抗原,病毒在细胞中产生核内包涵体。病毒能凝聚人、猴、豚鼠、小鼠和鸡等动物的红细胞。

    2临床症状

    幼猪的急性感染和妊娠母猪的感染都是亚临床的,主要的通常也是唯一的症状是繁殖失能(reproductivefailure)或称繁殖扰乱,以胚胎和胎猪感染及死亡为特征,但也有幼猪和妊娠母猪感染初期出现体温升高和白细胞减少的。

    2.1胚胎死亡、母猪返情

    胚龄在30~36d之前受到感染时会发生胚胎死亡并在下一个以一个情期临近时完全被母体吸收,母猪可能重新发情。

    2.2干尸化胎儿

    胎儿在50d后感染死亡时,由于胚胎骨骼钙化,死胎不能被完全吸收,导致胎儿干尸化。50~65d死亡者会严重干尸化,65~100d死亡者则部分干尸化。

    2.3流产

    当有严重的胎盘炎或全部胎儿死亡时,则发生流产,但发病极少,不是本病的特征。

    2.4死产

    母猪在妊娠55~80d被感染时,胎猪已逐渐产生免疫应答,受感染胎猪存活但太衰弱,不能耐受分娩时的逆境因素,多在分娩时或临近分娩时不能呼吸而死,残存的仔猪已有主动免疫力和抗体反应,仔猪组织器官中携带有PPV,并产生免疫耐受性,对PPV抗原刺激不产生免疫反应。

    由于每个胎猪都有单独的胎盘,病毒在子宫中扩散缓慢。因此,胎儿的感染和死亡不是同时发生。通常,并非全部的胎儿都受到PPV的损伤,因而,在一窝仔猪中,同时观察到产出不同大小木乃伊、死胎、弱胎和正常仔猪等不同组合。唯一的母体外观症状可能是腹围缩小,这是由于妊娠中后期胎儿死亡,死胎连同其外的胎液均被吸收的结果。繁殖障碍和其他表现有重新发情和不分娩、不孕、少仔、仔猪新生期的活力下降和死亡等,腹中有可使孕期和分娩间隔时间延长,这也促使外观正常的同窝仔猪的死胎增加。

    尚无证据表明PPV感染对公猪性欲和受精率有明显的影响。

    近年来,已从罹患腹泻综合征的2~3周龄仔猪小肠内容物、水泡性疾病仔猪的组织器官、肺炎的病肺和鼻炎的鼻中膈中分离出PPV,但其病原学作用尚需进一步研究证实。

    实验感染表明,经口服、静脉、肌肉、脑内或鼻腔感染无抗体的仔猪或SPF仔猪,除产生血凝抑制抗体外,均无临床症状和其他感染的证据,在感染后1~6d内,常出现病毒血症,3~7d由粪便排毒。并不规律地延续到14d。全部敏感猪在感染PPV后6~10d内迅速产生抗体,2~3周内抗体水平可达到1∶16384的最高滴度。

    3病理变化

    母猪在妊娠前期敏感已为多数人的报告所证实,孕猪感染PPV后1~6d出现病毒血症,并持续1~5d,这是实现胎盘感染的先决条件,受母源抗体制约的被动免疫力可持续4~9个月,母猪常在6~7月龄配种,因此,很多初配母猪(约50%)到配种时还没有建立主动免疫力,怀孕时就可能成为活动性感染。一般认为,4月龄以上的猪红细胞凝集抑制滴度在1∶256以上时,表明已有主动免疫;经胎盘感染也可发生于妊娠中期(70日龄)之后,此时胚胎能存活而无症状,原因可能是经胎盘感染需要10~14d,而胎儿在70日龄时,大都具有免疫应答而产生抗体了。

    一胎只有部分胎儿首先感染,并在子宫内相互传播。使更多同胎的猪发病,因此,PPV感染的几种结局可同时存在于同一胎的仔猪中,部分胚胎早期死亡的结果使窝产仔数减少。

    PPV对排卵前的卵细胞有何影响尚不清楚,病毒可附着在受精卵的透明带外面,虽然看来钻不进去,但仍怀疑它可能对以后的胚胎造成威胁。

    弱胎和死胎可能是PPV作用于各个组织器官和胎盘的结果,在无免疫力时,PPV在胎儿组织中大量复制,任何实质器官的病损(包括胎盘)都足以致其死亡。广泛侵害内皮系统是PPV的特点,这可阻碍胚胎血管肉的进一步发育。胚胎循环系统的损害表现为水肿、出血和体腔中羊水的蓄积、微观见内皮坏死。由于病毒的大量繁殖,到胚胎死亡时,大多数细胞都含有高的可被免疫荧光抗体技术查见的细胞质内抗原。

    未妊娠的母猪,组织器官中既无肉眼变化,也无微观变化,在不同妊娠期感染的母猪,同样缺乏肉眼变化,但在显微镜检查时,发现子宫内膜和肌层有单核细胞聚集的病灶,以及大脑、脊髓和眼脉络膜中由淋巴细胞及浆细胞组成的血管周围的细胞套。但在胎儿感染时,母体血清学阳性的小母猪,子宫只有局灶性淋巴细胞聚集,胚胎的肉眼可见病变是死亡和胚液被吸收,接着是胎儿软组织坏死和血管损害,病毒广泛分布于受感染的胚胎组织及其胎盘中,组织和胎盘中广泛存在着PPV抗原。

    胎儿免疫能力发生之前感染PPV时,引起发育障碍和生长不良,胎儿可见水肿、充血和出血,体腔中浆液出血性液体蓄积和脱水(干尸化)等病变,以及凸出的血管,胎盘中也观察到许多同样的变化。显微镜检查时发现胎儿多种组织和器官在在广泛的坏死灶、炎症和核内包涵体。

    怀孕70d后受到PPV感染的的死猪对PPV有明显的免疫应答,只有微观变化,特别是眼、脑、肺及肠系膜等处的灶性或弥散性单核细胞浸润和内皮萎缩,以及大脑灰质、白质和柔脑膜的血管周围由腺上皮细胞、组织细胞、少许浆细胞增生而形成和血管套为特征的脑脊髓炎、脑膜脑炎。也有人在从怀孕后期感染PPV的活猪中见到类似病变。

    在怀孕中期感染PPV的胎猪,引时免疫能力尚不足以抵抗本病,坏死和单核球浸润都可发生。

    4流行病学

    易感母猪在怀孕前半期口鼻腔暴露于病毒而发生感染。荧光抗体检查证明病毒主要分布于猪体内一些增生迅速的组织,如淋巴结生发中心、结肠固有层、肾间质、鼻甲骨膜等。

    在感染后第3~7天开始经粪便排出病毒,以后不规则排毒,胎儿可通过胎盘感染。污染的猪舍可能是PPV的主要储藏所,在病猪移出后空圈4个半月,经通常方法清扫的猪圈,当再放进易感猪时,仍可被感染,公猪可能在PPV的散播方面起重要作用。在急性感染时病毒可经多种不同途径排出,包括精液。精液可能由于含病毒的粪便从外界污染,也可能通过生殖道(睾丸、阴囊淋巴结等)污染,在病毒传播方面可能比精液更为重要的是公猪在配种季节时的移动,因为这增加了使病毒通过机械方式引入易感母猪群的机会。

    5诊断

    许多母猪出现系列障碍综合症表明猪场中可能存在PPV,但是,最终诊断须依靠实验室检查。中和试验、免疫荧光技术、免疫电镜,对流免疫电泳、补体结合试验、琼脂免疫扩散、血球凝集抑制试验和酶联免疫技术都可用于PPV的诊断。但测定血清抗原的最常用的方法是血液凝集抑制试验,一般在受感染后第5天即可测出,并持续数年,而免疫荧光和免疫电镜是检测病料中PPV的最敏感可靠而快速的方法。

    如果只是小母猪出现流产综合征而经产母猪无恙或极少发病,就应进行PPV的深入诊断,在出现繁殖失能的同时,母猪发病,就应怀疑为其他传染性繁殖扰乱。

    5.1送检的供抗原检查的病料

    (1)几个干尸化胎儿(长度小于14~16cm);(2)胎儿的肺、脾、肾。不要送检大的木乃伊胎儿(大于7日龄)、死产仔猪或初生仔猪,因其含有PPV抗体而干扰检验;(3)受损的一胎仔猪中存活的个体,取肾做自体培养,一般2d可分离出PPV。

    5.2供检查PPV抗体的病料为

    (1)70日龄以上(大于16cm)的胎猪血清;(2)吃初乳前的新生仔猪血清;(3)死产仔猪的渗出液;(4)发生繁殖障碍的小母猪血清。

    猪被暴露于PPV后最早第5天就可检出抗体,并持续好几年,被检血清一定要56℃30min灭活,并用红细胞吸附,以及用高陵土?是,以排除自然存在的非特异性抑制物和血凝素。血清中和试验较少用,主要用作来测定或滴定PPV体液抗体,通常是根据失去或减少核内包涵体或培养物中的荧光细胞或培养液中的病毒血凝素来确定病毒的感染性。仔猪体内发现PPV抗体说明存在胎内感染。大猪的血凝抑制抗体滴度通常>256。在具体应用时,应采取双份血清,并与临床发病情况相结合进行综合判定。由于PPV广泛存在,少数单份血清的检查毫无意义。鉴于母源抗体不能穿过母胎交接界,所以检查胎儿和死产猪的血清抗体以及新生仔猪初乳前血清抗体,就可判明是否发生子宫感染。

    在免疫应答建立之前流产的胎儿,可使用血球凝集反应来检查PPV抗原,为此,取胎儿脏器制成20%~30%悬液,1000转/分离心20min,用上清液与豚鼠红细胞(用PH7.2PBS制成0.5%红细胞悬液)进行血球凝集反应,将待检的病毒液用同批PBS进行连续双倍稀释,等量混合后,放室温作用2h进行读数,最后按能完全找或不完全的产生血球凝集的病毒最高稀释度的倒数来表示血凝活性的滴度。

    在免疫能力建立之后的流产胎儿。因其组织中含有抗体,在制备悬液时,与之结合在一起的抗原会干扰检查结果。

    PPV的分离不常进行,首先,PPV会随胎猪的死亡而逐渐消失,从木乃伊中PPV分离有时比较困难而且费时,其次,PPV在外界的存活力强而易于造成实验室的污染,对其他实验检查标榜和细胞培养有很大的危险性,第三,供PPV分离而使用的细胞原代培养可能已受到PPV的污染而干扰诊断结果。

    近来,为了从流产胎猪中发现PPV,使用了比免疫荧光法更为敏感特异的免疫电镜法。

    鉴别诊断:应注意PPV感染与其他传染性和非传染性繁殖扰乱的鉴别。

    7治疗和预防

    7.1健康猪场应防止PPV从外界传入,尤其是引种,应做好调查研究和隔离检疫30d,经验表明,很少有无PPV的猪群,即使是执行了严格的兽医卫生措施的猪场也是如此,如果将PPV带入敏感猪群,将会引起一场“木乃伊风暴”,其结果将是灾难性的。

    7.2在PPV阳性场,应对留种的青年公、母猪适当推迟初配年龄(8月龄以上),并在繁殖配种前1~2个月进行自然人工感染,其方法是(1)把小母猪赶入关养过阳性猪的栏圈内饲养;(2)饲喂阳性猪的新鲜粪便,使其通过感染而建立主动免疫力,以免在首次怀孕时感染而引起繁殖障碍,也有将木乃伊猪捣碎喂小母猪的。(3)母猪在配种前几周注射疫苗,一般要求母源抗体转阴之后注苗。灭能苗安全有效,免疫期4个月以上,可保护母猪经胎盘感染PPV,经产母猪和公猪也应接种疫苗,以减少带毒和排毒。以通过猪睾丸(ST)细胞120~165代致弱的PPV毒株,以胎猪肾(PFK)细胞培养制成的弱毒苗,肌肉注射后可预防初产母猪的PPV感染,虽然疫苗毒株不会透过怀孕的胎盘屏障,但当直接接种子宫内时对胎儿有致病性,因此这种疫苗只宜用于未怀孕的初产母猪。目前,有的国家已研制出了二联、三联和四联疫苗,供防制多种传染性母猪繁殖扰乱用。

    7.3不用来自木乃伊窝的幸存者和头胎母猪的后代作种。已发生一次繁殖障碍的初产母猪不必淘汰,这些猪在以后的生产中多会正常产仔。

    7.4用不带PPV的公猪精液人工授精。从外场引起小公猪和小母猪时,其带入PPV的危险性要比一岁以上的种猪大得多,来自PPV的阳性场的猪至少是体表带PPV而应隔离并用适当的药液喷洒消毒。

    7.5执行严格的兽医卫生措施,猪舍周围应用3%的次氯酸钠或5%的苛性钠消毒,死胎、木乃伊、流产胎儿、胎盘和其排出物应热处理或火化,污染场地应严格消毒。

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